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產(chǎn)品中心化學(xué)試劑常用化學(xué)試劑10mg;50mgBisindolylmaleimide IX (Ro 31-8220) Mesylate
Bisindolylmaleimide IX (Ro 31-8220) Mesylate
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 品牌 | 其他品牌 | 純度 | 99.7 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | S7207 | 規(guī)格 | 10mg;50mg |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) |
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
基本信息
Bisindolylmaleimide IX (Ro 31-8220 Mesylate)是一種pan-PKC抑制劑，作用于PKC-α， PKC-βI， PKC-βII， PKC-γ和PKC-ε，IC50分別為5 nM， 24 nM， 14 nM， 27 nM和24 nM，也有效抑制MAPKAP-K1b， MSK1， GSK3β和S6K1。
| 產(chǎn)品描述 | Bisindolylmaleimide IX (Ro 31-8220 Mesylate)是一種pan-PKC抑制劑，作用于PKC-α， PKC-βI， PKC-βII， PKC-γ和PKC-ε，IC50分別為5 nM， 24 nM， 14 nM， 27 nM和24 nM，也有效抑制MAPKAP-K1b， MSK1， GSK3β和S6K1。 | ||||||||||
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| 靶點(diǎn) |
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| 體外研究(In Vitro) | ||||
| 體外研究活性 | RO31-8220抑制大鼠腦蛋白激酶C活性，IC 50為23 nM，在PKC-α，PKC-β，PKC-γ，PKC-ε之間沒(méi)有選擇性。[1] RO31-8220也抑制MSK1，MAPKAPK1，RSK，GSK3β和S6K1，具有對(duì)PKC相似的效力。此外，RO31-8220抑制電壓依賴性鈉離子通道。[2] RO31-8220改變細(xì)胞蛋白激酶C的定位并有效抑制A549細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)，IC 50分別為0.78 μM和0.897μM。[3] 在兒茶酚胺低反應(yīng)血小板中，RO31-8220通過(guò)增強(qiáng)Akt的磷酸化增強(qiáng)了腎上腺素誘導(dǎo)的血小板聚集。[4] 通過(guò)抑制apoE基因的囊泡運(yùn)輸?shù)劫|(zhì)膜，RO31-8220顯著降低載脂蛋白E從原代人巨噬細(xì)胞的分泌，沒(méi)有顯著影響ApoE的mRNA水平或蛋白水平。[5] | |||
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| 激酶實(shí)驗(yàn) | PKC活性檢測(cè) | |||
| 測(cè)定混合物含有0.2 mg/mL的γ肽，10 μM氯化鎂，0.6 mM氯化鈣，10 μM[[γ-32P]ATP，1.25 mg/mL的磷脂酰絲和1.25 ng / mL在20mM HEPES（pH值7.5）中的佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯，2 mM EDTA，1 mM的二硫蘇糖醇及0.02％（重量/體積）的Triton X-100。肽-γ是一種合成肽，GPRPLFCRKGSLRQKW，類似PKC-γ假底物位點(diǎn)，不同的是一個(gè)絲殘基替換的假底物丙，將所述肽從抑制劑成substrat。測(cè)定是通過(guò)添加2.5 m單位酶來(lái)啟動(dòng)，在30℃溫育10分鐘，并通過(guò)點(diǎn)樣到P81紙終止，接著在75mM的磷酸中充分洗滌。該紙?jiān)儆靡掖枷礈?，干燥，和結(jié)合的放射性通過(guò)liquidscintillation光譜測(cè)定。 | ||||
| 細(xì)胞實(shí)驗(yàn) | 細(xì)胞系 | 人肺腺癌A549和MCF-7乳腺癌細(xì)胞 | ||
| 濃度 | 2.5 μM | |||
| Bisindolylmaleimide IX (Ro 31-8220) Mesylate孵育時(shí)間 | 24-48 小時(shí) | |||
| 方法 | 人肺腺癌A549和MCF-7乳腺癌細(xì)胞是從動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)歐洲保藏中心（ATCC）獲得。細(xì)胞（傳代次數(shù)10-30）在5％二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，前者在含青的Ham氏F-12培養(yǎng)基中培養(yǎng)，后者在含丙酮酸（1毫摩爾）和非必需氨基酸的最小必需培養(yǎng)基（Eagle修改）中培養(yǎng)。兩種培養(yǎng)基均補(bǔ)充有10％FCS和谷氨（2毫摩爾）。細(xì)胞傳代培養(yǎng)每周兩次以保持對(duì)數(shù)增長(zhǎng)。對(duì)細(xì)胞增殖的研究，細(xì)胞接種和培養(yǎng)用3ml包含試劑的培養(yǎng)基，其中被補(bǔ)充以48小時(shí)（A549 ）或72小時(shí)（MCF -7）的時(shí)間間隔。在藥物溫育4天（A549）或6天（MCF-7）后，細(xì)胞數(shù)目用Coulter計(jì)數(shù)器ZM評(píng)估。為了實(shí)現(xiàn)PKC耗竭，細(xì)胞溫育在bryostatin 1（1 μM）中24小時(shí)。在這些條件下bryostatin1所造成的生長(zhǎng)抑制是微不足道的。bryostatin在細(xì)胞2小時(shí)恢復(fù)期后充分洗滌除去。在以往使用A549細(xì)胞的研究中，該洗滌過(guò)程已被證明可減少bryostatin介導(dǎo)的效應(yīng)。然后將細(xì)胞溫育與staurosporine，RO 31-8220，UCN- 01或H- 7再溫浴24小時(shí)。在一些實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞與抑制劑孵育48小時(shí)而不是24小時(shí)，在此情況下bryostation并未除去并留在溫育液中。去除抑制劑后，抑制DNA合成是由[3H]Tdr摻入細(xì)胞的測(cè)定進(jìn)行評(píng)價(jià)。放射性用Packard 1500 Tricarb閃爍計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)。 | |||
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