ELISA在轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)中的應(yīng)用

玉米螟是玉米的主要害蟲(chóng)之一，統(tǒng)計(jì)資料表明每年因玉米螟而造成的損失產(chǎn)量在5%左右。20試劑90年代以來(lái)，通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)將蘇云金桿菌的Bt毒蛋白基因?qū)胗衩锥@得的抗玉米螟雜交種已成為一種有效的防止玉米螟危害的方法。目前，在所有轉(zhuǎn)基因玉米品種中,Bt玉米的終止面積zui大效果，是大規(guī)模商業(yè)化的主要轉(zhuǎn)基因玉米品種。

中國(guó)專家應(yīng)用純化的Bt1殺蟲(chóng)晶體蛋白質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白和免疫抗原，通過(guò)抗體-抗原-酶標(biāo)抗體反應(yīng)，建立了簡(jiǎn)介酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，對(duì)4中進(jìn)口轉(zhuǎn)基因玉米實(shí)物樣品進(jìn)行了測(cè)定。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中首先通過(guò)建立的間接ELISA檢測(cè)方法對(duì)Bt1蛋白的顆粒比標(biāo)準(zhǔn)曲線、Bt1、蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)間接ELISA法檢測(cè)得到的Bt1蛋白的顆粒比標(biāo)準(zhǔn)曲線與質(zhì)量您濃度標(biāo)注曲線以及間接法測(cè)定的玉米實(shí)物樣品結(jié)果，可以換算得到樣品顆粒比結(jié)果與質(zhì)量弄對(duì)結(jié)果，并得到了免疫印證分析的驗(yàn)證。同時(shí)在實(shí)驗(yàn)中，還設(shè)立了陰性(NC,顆粒比0%)、陽(yáng)性（pc、顆粒比0.15%)和空白（BC,提取液）3ge duizhao ,并與雙抗體夾心法做了比較，對(duì)照以及對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果一致，顯示應(yīng)用該方法檢測(cè)玉米實(shí)物的結(jié)果是可靠的。與此同時(shí)，此種方法對(duì)Bt1蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度zui低可撿值為0.312ug/ml和顆粒比zui低可檢值為0.15%。該實(shí)驗(yàn)中建立的簡(jiǎn)介ELISA檢測(cè)方法不僅可以成功檢測(cè)處轉(zhuǎn)基因玉米種的Bt1蛋白，而且還具有由于試劑盒法的靈敏度，快速簡(jiǎn)便，見(jiàn)底了檢測(cè)成本

部分專家采用了ELISA檢測(cè)法對(duì)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)玉米品的4個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期的不同部位的Bt蛋白進(jìn)行了定量分析。通過(guò)對(duì)樣品玉米在雄前，抽絲，灌漿初期和乳熟末期這四個(gè)時(shí)期的第10、15、21、頁(yè)及莖表皮，莖髓，雄穗小花，花粉，雄穗干，花絲，雌穗軸，雌穗柄，籽粒共12個(gè)部位的取樣，前處理后用進(jìn)口ELISA試劑盒對(duì)標(biāo)準(zhǔn)Bt毒蛋白和樣品進(jìn)行檢測(cè)，以標(biāo)準(zhǔn)Bt°蛋白濃度為縱坐標(biāo)，以ELISA法測(cè)定的相對(duì)應(yīng)OD450nm值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線1以牛血清白蛋白BSA為標(biāo)準(zhǔn)利用考司馬亮藍(lán)G250法繪制OD450nm值歲標(biāo)準(zhǔn)可溶性蛋白BSA含量變化繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線2將樣品測(cè)得OD450nm值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線1相對(duì)應(yīng)的線性方程，便可以計(jì)算出代測(cè)樣品的Bt蛋白含量。通過(guò)與可溶性蛋白相比較，轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)玉米Bt毒蛋白站可溶性蛋白的比例，可以看出出花粉外，轉(zhuǎn)基因玉米的其他11個(gè)部位Bt毒蛋白含量比例隨著作物的生長(zhǎng)周期的延伸呈上升趨勢(shì)。說(shuō)明隨著B(niǎo)t毒蛋白表達(dá)量的提高，玉米的抗蟲(chóng)能力會(huì)不短增強(qiáng)。由于ELISA方法易受檢測(cè)環(huán)境的溫度和濕度等影響，所以在實(shí)驗(yàn)中研究者選擇相同的實(shí)驗(yàn)環(huán)境，并且通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線降低了系統(tǒng)的誤差。同時(shí)以陰性玉米材料（即不表達(dá)Bt毒蛋白）和空白為對(duì)照，未檢查Bt毒蛋白，也證實(shí)了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。該實(shí)驗(yàn)的Bt毒蛋白zui低檢出量為0.5ng/ml

ELISA試劑盒