血漿中水楊酸的HPLC測(cè)定法

一、目的要求

1、掌握血液樣品前處理方法

2、掌握回收率測(cè)定方法和計(jì)算方法、

二、主要儀器和藥品。

 液相色譜儀,ODS分析柱，水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品，空白血漿，標(biāo)準(zhǔn)血樣。

三、實(shí)驗(yàn)方法

水楊酸（Salicylic Acid)

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（150mm x 4.6mm,5um)流動(dòng)相：甲醇-磷酸二氫鉀（10mmol/L，ph3.0）（5:5）：流速1ml/min：檢測(cè)波長(zhǎng)230nm：進(jìn)樣體積20uL.理論板數(shù)以水楊酸峰計(jì)不低于2000.

血漿中水楊酸回收率測(cè)定：取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，加甲醇溶解并稀釋成0.5mg/mL的對(duì)照品溶液，取適量用流動(dòng)相稀釋成20ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液。另取空白血漿0.4ml，加入25ul水楊酸對(duì)照品溶液，漩渦混勻，加入0.2ml6%高氯酸沉淀蛋白，10000r/min離心10min，取上清液作為樣品測(cè)定液。同法制備血漿空白液，取對(duì)照品稀溶液，樣品測(cè)定液和需將空白頁(yè)各20ul、進(jìn)行，記錄色譜圖。

回收率計(jì)算：根據(jù)對(duì)照品稀溶液濃度，峰面積和樣品測(cè)定液峰面積，水楊酸加入量，計(jì)算回收率。對(duì)照品稀溶液濃度C對(duì)=20ug/ml，樣品測(cè)定液中加入的水楊酸濃度Cm=（0.023 x 500）/（0.4+0.2+0.025）=20ug/ml，所以血漿中水楊酸回收=A樣/A對(duì) x 100%

四、注意事項(xiàng)

1、標(biāo)準(zhǔn)品溶液與樣品液必須分別重復(fù)進(jìn)行三次，取平均峰面積進(jìn)行計(jì)算。

2、外標(biāo)法測(cè)定含量，樣品處理中應(yīng)嚴(yán)格定量操作。

3、為獲得高的精密度，驚醒量必須大于定量環(huán)容積的2-3倍

標(biāo)準(zhǔn)品