微量法 100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

鎂是多種酶的激活劑，如磷酸酶、肌酸激酶、己糖激酶和羧化酶等。鎂也是組成DNA、RNA及核糖體大分子結(jié)構(gòu)所必需的元素。鎂是維持正常神經(jīng)和肌肉功能的重要元素。血清鎂濃度偏離正常值，與某些腎臟和內(nèi)分泌疾病等相關(guān)。

測定原理：

鎂離子在堿性介質(zhì)中氫氧化成膠體粒子，進一步與達(dá)旦黃結(jié)合后呈橘紅色，在一定范圍內(nèi)，540nm吸光度與鎂離子濃度成正比。

自備儀器和用品：

可調(diào)式移液槍、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配置：

試劑一：液體2mL×1管，4℃保存。

試劑二：液體2mL×1管，4℃保存。

試劑三：液體5mL×1瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體1mL×1管，0.2 mmol/L鎂標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到540 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取EP管，加入120μL蒸餾水，20μL試劑一，混勻；進入20μL試劑二，混勻；加入40μL試劑三，混勻。靜置5min后于540nm測定吸光度，記為A空白管。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液，110μL蒸餾水，20μL試劑一，混勻；進入20μL試劑二，混勻；加入40μL試劑三，混勻。靜置5min后于540 nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 測定管：加入10μL血清，110μL蒸餾水，20μL試劑一，混勻；進入20μL試劑二，混勻；加入40μL試劑三，混勻。靜置5min后于540 nm測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

血鎂濃度計算：

血鎂含量(mmol/dL)= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V樣總

                 =0.02×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)液：0.2 mmol/L；V樣總：樣品總體積，1 dL=0.1 L。

注意事項：

1. 該試劑盒使用過程中，應(yīng)盡量避免光照射；

2. 血液采取過程中，宜空腹采血，避免使用枸櫞酸鈉抗凝劑；

3. 紅細(xì)胞內(nèi)鎂含量約為血清含量的3倍，應(yīng)避免溶血，并及早將血清分離。

4. 加入試劑三混勻后應(yīng)該在30 min內(nèi)測定吸光度。

5. 低檢出限為0.1mmol/L。

血鎂濃度檢測試劑盒配方（微量法 100T/96S）

試劑一：取2 mL EP管，加入2mg聚乙烯醇，溶解于2 mL50℃蒸餾水。

試劑二：取2 mL棕色EP管，加入0.4 mg達(dá)旦黃，加2 mL蒸餾水充分溶解。

試劑三：取5 mL試劑瓶，加入0.375 g NaOH，加入5mL蒸餾水溶解。

標(biāo)準(zhǔn)液：稱取1 mg MgSO4•7H2O，加蒸餾水4.057 mL充分溶解；取EP管，加入0.2 mL上述溶液，0.8 mL蒸餾水，混勻，即為0.2 mmol/L鎂標(biāo)準(zhǔn)液。