【獸用名稱】

通 用 名  豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒

商 品 名  無

英 文 名  Blocking ELISA Kit For Detection of Antibodies to Classical Swine Fever Virus  

漢語拼音  Zhuwenbingdu Zuduan ELISA Kangti Jiance Shijihe

【作用與用途】  用于檢測豬瘟病毒抗體。

【注意事項】

（1）實驗前，將試劑盒取出置25℃±3回溫，至少30分鐘，實驗完成后置2～8℃保存。

（2）若試劑盒陰陽性對照、酶標(biāo)記物出現(xiàn)少量懸浮物，屬正?，F(xiàn)象。

（3）請在試劑盒規(guī)定的有效期內(nèi)使用；禁止非同批試劑盒混用。

（4）沒有用完的抗原包被板應(yīng)貯存在密封塑料袋內(nèi)，置2～8℃存放。

（5）避免底物液暴露于強光，避免接觸氧化劑。

（6）濃縮洗滌液用蒸餾水或純水稀釋，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。

（7）嚴(yán)格按照操作程序，仔細(xì)的吸液、計時，充分洗滌，對于獲得精確的結(jié)果是非常必要的。

（8）使用血清稀釋板將所有待檢血清稀釋好，再進行檢測。

【用法與判定】  

1  用法

1.1  樣品準(zhǔn)備  取動物全血，待血液凝固后，4000r/min離心10分鐘，收集上清?；虿杉?，待凝固后自然析出血清。血清應(yīng)清亮，無溶血。

1.2  樣品稀釋  在血清稀釋板中，用樣品稀釋液按1:1的比例稀釋待檢血清（例如：120μl樣品稀釋液中加120μl待檢血清）；陰性、陽性對照不稀釋，直接使用。

1.3  洗滌液配制20倍濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫（20~25℃），搖動使沉淀溶解（建議在37℃水浴鍋中加熱至溶解），然后用蒸餾水或純水作20倍稀釋，混勻（例如：10ml的濃縮洗滌液加上190ml純水）。稀釋好的洗滌液在2~8℃可以存放7日。

1.4  操作步驟

1.4.1  取抗原包被板（根據(jù)樣本多少，可拆開分次使用），每孔加入稀釋好的洗滌液300µl，不必靜置，棄掉孔中洗滌液，洗滌2次，最后一次拍干。每孔加入稀釋好的樣本100μl；另外設(shè)陽性對照、陰性對照各2孔，100μl/孔。置37℃孵育60分鐘。

1.4.2  棄去板中液體，每孔加入稀釋好的洗滌液300µl，不必靜置，棄掉孔中洗滌液，重復(fù)洗滌共計洗板5次，最后一次拍干。

1.4.3  每孔加入100μl酶結(jié)合物，輕微振蕩混勻。置37℃下孵育30分鐘。

1.4.4  棄去板中液體，洗滌5次，方法同1.4.2。

1.4.5  每孔加底物顯色液100µl，室溫（20~25℃）避光顯色10分鐘。

1.4.6  每孔加終止液50µl。10分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測定并記錄各孔在630nm波長處的吸光度（OD）值（測定前輕輕振勻，勿溢出）。

2  判定

2.1  成立條件  在酶標(biāo)儀上測各孔OD_630nm值，試驗成立條件是陰性對照的OD_630nm平均值≥0.6，陽性對照的OD_630nm平均值≤0.5

2.2  判定標(biāo)準(zhǔn)  S為樣品孔OD_630nm值，N為陰性對照OD_630nm平均值。

阻斷率=（1-S/N）×100%

如果阻斷率<40%，判為豬瘟病毒抗體陰性；

如果阻斷率≥40%，判為豬瘟病毒抗體陽性。

【規(guī)格】96 孔/盒或192 孔/盒或480 孔/盒

【貯藏與有效期】  2~8℃保存，有效期為12個月。