兔ELISA試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心ELISA法定量測(cè)定兔血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)、上清液和其他生物液體中兔血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA試劑盒含量。

　　將兔血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的兔血管緊張索轉(zhuǎn)化酶(ACE)與連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入生物素化的兔血管緊張索轉(zhuǎn)化酶(ACE)抗體，將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP標(biāo)記的親和素，再次洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃顏色。顏色的深淺和樣品中的兔血管緊張索轉(zhuǎn)化酶(ACE)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450m波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(0.D.值)，計(jì)算樣品濃度。

　　兔ELISA試劑盒的洗滌方法：

　　1、自動(dòng)洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

　　2、手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

　　3、加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

　　4、棄去液體，甩干，每個(gè)孔中加入DetectionAb工作液100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。

　　5、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

　　6、每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。

　　7、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

　　8、每孔加底物溶液100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯色酌情縮短或延長(zhǎng)，但不可超過(guò)30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí)，即可終止)。

　　9、每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃顏色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

　　10、立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開(kāi)酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測(cè)程序。

　　11、實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。