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更新時間：2021-10-22
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紫外分光光度法
產(chǎn)品簡介：
PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類代謝的關鍵酶， 與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關，在植物正常生長發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 處有最大吸收值，通過測定吸光值升高速率計算 PAL 活性。
試驗中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×3 瓶，4℃保存，臨用前每瓶加入 4mL 雙蒸水充分溶解待用；現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；
操作步驟：
一、粗酶液提?。?/span>
稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
二、測定操作表：
1、分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 290nm，蒸餾水調(diào)零。
2、操作表
試劑名稱 | 測定管（µL） | 對照管（µL） |
樣本 | 20 | |
試劑一 | 780 | 800 |
試劑二 | 200 | 200 |
混勻，30℃準確水浴 30min | ||
試劑三 | 40 | 40 |
混勻，靜置 10min 后，用對照管調(diào)零，290nm 處記錄測定管吸光值 A (A=A 測定管-A 對照管)。
PAL 活性計算：
a. 按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在每 ml 反應體系中每分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.1 定義為一個酶活力單位。
PAL（U/mg prot）=A×反應總體積（1040µL）÷樣本體積（20µL）÷反應時間(30min)÷0.1 ÷蛋白濃度（mg/mL）=17.3×A ÷蛋白濃度（mg/mL）
a. 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織在每 ml 反應體系中每分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.1 定義為一個酶活力單位。
PAL（U/g 鮮重）=A×反應總體積（1040µL）÷﹝樣本鮮重（g）×樣本體積（20µL）÷V 樣總（1mL）﹞
÷反應時間(30min)÷0.1 =17.3×A ÷樣本鮮重（g）
當前位置：
