產(chǎn)品簡介：

Acridine Orange,AO 屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標(biāo)記DNA、RNA，屬于異染性熒光染料。該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核DNA 和RNA 染色。因此AO 常用于細(xì)胞內(nèi)DNA 和RNA 進(jìn)行檢測。AO 與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO 嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，這種結(jié)合方式主要為AO 與DNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為530nm， 激發(fā)后呈綠色熒光；2、靜電吸引，帶正電荷的AO 與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合，這種結(jié)合方式主要為AO 與RNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，吖啶橙嵌合到雙鏈DNA 分子中顯綠色，與DNA 單鏈或RNA 結(jié)合時發(fā)桔黃色或橙紅色熒光。

AO 染色試劑盒(Acridine Orange DetectionKit)主要由AO Stain、AO Stain Buffer 組成，常用于細(xì)胞凋亡的檢測。染色后在熒光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。AO 使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。AO 染色常與EB 染色合用雙染，EB 只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

產(chǎn)品組成：

 自備材料：

1、 熒光顯微鏡

2、 低速離心機(jī)

3、 PBS

4、 細(xì)胞計數(shù)板

5、 載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：

(一) AO 單獨染色

1、收集細(xì)胞(采用流式細(xì)胞儀檢測時，應(yīng)先固定細(xì)胞)，用 AO Stain Buffer(1×)清洗細(xì)胞 1 次，加入適量的 AO Stain Buffer(1×)重懸細(xì)胞，計數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至 10⁶/ml。

2、取適量的細(xì)胞懸液和 AO Stain，按照細(xì)胞懸液:AO Stain=19:1 的比例混合，輕輕混勻。如果采用熒光顯微鏡下觀察，一般取 95μl 細(xì)胞懸液和 5μlAO Stain 混合即可。

  3、室溫避光染色 15min，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細(xì)胞儀分析。

  4、熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長 488nm，阻斷濾光片波長 515nm)，計數(shù)并拍照。

 染色結(jié)果：

 (二) AO/EB 雙染色

(二) AO/EB 雙染色

1、收集細(xì)胞，用 AO Stain Buffer(1×)清洗細(xì)胞 1 次，加入適量的 AO Stain Buffer(1×) 重懸細(xì)胞，計數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至 10⁶/ml。

2、取適量的細(xì)胞懸液和 AO Stain，按照細(xì)胞懸液:AO Stain=19:1 的比例混合，并加入適量 EB 染色液，輕輕混勻。如果采用熒光顯微鏡下觀察，一般取 95μl 細(xì)胞懸液和 5μl AO Stain 混合即可。

3、室溫避光染色 15min，滴加于載玻片上并加蓋玻片

4、熒光顯微鏡濾光片 515nm 觀察，計數(shù)并拍照。

染色結(jié)果

注意事項：

1、AO 染色常與 EB 染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

2、如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳，同時應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時間。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： 6 個月有效。