分光法 50T/48S

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

 測定意義： 羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物分子，造成細胞結構和功能受損，進而導致體內(nèi)代謝紊亂 引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標之一，在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應用。

測定原理：

H₂O₂/ Fe²⁺ 通過 Fenton 反應產(chǎn)生羥自由基，水楊酸能有效捕捉產(chǎn)生的羥自由基并與其反應生成有色物質(zhì) 2，3-二羥基苯甲酸，在 510nm 處有大吸收峰，加入具有清除能力的物質(zhì)后，有色物質(zhì)便會減少，從而可以根據(jù)吸光值的數(shù)值判斷樣品清除羥自由基的能力。

自備實驗用品：

恒溫水浴鍋、可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體 18 mL×1 瓶，4℃避光保存。

樣品的制備：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 蒸餾水）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2. 血清、果汁等液體樣品可直接測定。

3. 提取物（或者藥物）可配制成一定濃度，如 5 mg/mL。

操作步驟：

1. 分光光度計預熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 510nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 在 EP 管中加入如下試劑

 注意：空白管和對照管只需測定一次。

計算公式:

羥自由基清除率 D% =（A 對-A 測）÷（A 對-A 空）×100%

A 對、A 空、A 測：對照管、空白管和測定管的吸光值。

注意事項:

為了比較不同樣品羥自由基清除能力，對于同一批樣品必須加入等量的樣品，血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。