ELISA試劑盒在實(shí)際應(yīng)用的過(guò)程中，得通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，不好走和方法都是有很多種類(lèi)的，像是接法、競(jìng)爭(zhēng)法、雙位點(diǎn)一步法、捕獲法測(cè)IgM抗體、應(yīng)用親和素和生物素的ELISA。今天小編就跟大家講講ELISA方法設(shè)計(jì)都有哪些原理？

　　ELISA試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。

　　應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。

　　ELISA試劑盒TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的濃度。

　　ELISA如何保證測(cè)定溫度?

　　為了保證測(cè)定的準(zhǔn)確性，通常要求測(cè)定條件*一致。對(duì)于操作而言，主要是測(cè)定溫度加液體積、加液順序和反應(yīng)時(shí)間一致。保證測(cè)定溫度一致的措施通常如下。

　　優(yōu)先選用帶溫控裝置的儀器，如上等分光光度計(jì)或者酶標(biāo)儀，可以直接設(shè)定需要的溫度。但是要注意預(yù)熱。

　　打開(kāi)房間的空調(diào)，根據(jù)天氣情況設(shè)定制冷或者加溫，并且待室溫穩(wěn)定后再開(kāi)始測(cè)定。

　　提前一小時(shí)冰箱中取出試劑，放到室溫中。還可以利用水浴鍋保溫反應(yīng)體系中體積zui大的試劑，通常是緩沖液。這樣，即使不是測(cè)定溫度，但是可以保證不同樣品基本在幾乎同樣的溫度下測(cè)定。注意，待保溫的試劑應(yīng)該先放到水浴鍋中，然后加溫到溫度，這樣可以保證試劑溫度與水浴鍋溫度一致；或者待保溫試劑要在已經(jīng)達(dá)到溫度的水浴鍋中保溫超過(guò)半小時(shí)以上。

　　如果當(dāng)?shù)販夭钭兓螅欢ㄒ⒁庹{(diào)整室溫。