葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

測(cè)定意義

GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動(dòng)物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產(chǎn)生 H2O2，是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。

測(cè)定原理

GOD 催化產(chǎn)生 H2O2，過氧化物酶在有氧存在時(shí)催化 H2O2 分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì)，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關(guān)系。

試驗(yàn)中所需的儀器和設(shè)備

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；試劑一：液體 40 mL×1 瓶，4℃保存；試劑二：液體 8 mL×1 瓶，4℃保存；試劑三：液體 2 mL×1 支，4℃保存；

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備

組織處理：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

血清（漿）：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 500nm，蒸餾水調(diào)零。

2、GOD 檢測(cè)工作液的配制：用時(shí)將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中，充分混勻，待用。3、測(cè)定前將 GOD 檢測(cè)工作液在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。4、在 1mL 玻璃比色皿中加入 40μL 樣本和 960μL 工作液，立即混勻并計(jì)時(shí)，記錄 500nm 下 20s 吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2。計(jì)算ΔA＝A2-A1。

GOD 活力單位的計(jì)算

1、血清（漿）GOD 活力的計(jì)算

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=3333×ΔA

2、動(dòng)物組織 GOD 活力的計(jì)算（1）按蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr)÷T=3333×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/ g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T=3333×ΔA÷W V 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10^-3 L；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺摩爾消光系數(shù)，7.5×10³ L / mol /cm；

d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.04 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。